上调hMLH1基因表达对卵巢癌药物敏感性的影响

摘要：

构建携带错配修复基因hMLH1编码序列全长的真核表达质粒pCAN-hMLH1,并探讨其对卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用.应用基因重组技术将pET28-hMLH1中的目的基因hMLH1定向克隆到真核表达载体pCAN,经酶切及测序鉴定;分别将pCAN-hMLH1和空质粒pCAN转染进卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP,同时以对顺铂敏感的SKOV3细胞和未转染的SKOV3/DDP细胞作为对照;应用RT-PCR和Western blot检测转染前后细胞内hMLH1 mRNA和蛋白的表达变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化;Hoechst染色检测转染前后细胞的凋亡.结果提示:pCAN-hMLH1重组质粒经酶切及测序鉴定,表明真核表达质粒构建正确;采用脂质体法转染SKOV3/DDP细胞后,RT-PCR和Western blot检测到耐药细胞内hMLH1的表达增强;MTT结果显示转染重组质粒后SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性显著增加;Hoechst染色观察到转染后耐药细胞的凋亡明显增强.该研究成功构建了pCAN-hMLH1重组质粒,在SKOV3/DDP细胞中进行表达,并能增强耐药细胞对顺铂的敏感性,促进耐药细胞的凋亡.

关键词：hMLH1、错配修复、卵巢癌、耐药

所属期刊栏目：36

在线出版日期：2014-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：217-221