海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞

摘要：

细胞冷冻保存技术是动物研究的重要组成部分.该研究首次应用海藻酸微囊冷冻保存绵羊精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs),旨在提高绵羊SSCs的冷冻保存效率.冻存前后对绵羊SSCs存活率进行评估,在绵羊SSCs液氮冻存10 d后进行细胞培养和CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1五个精原干细胞特异分子标记蛋白的免疫荧光鉴定.结果表明,在液氮冻存1d后,绵羊SSCs存活率从58.4％±1.4％(单细胞悬液冻存组)提高到78.7％±1.3％(海藻酸微囊包埋冻存组);液氮冻存10d后,单细胞悬液冻存组细胞存活率降低至48.1％±0.8％,而海藻酸微囊包埋组细胞存活率仍保持在78.0％±1.5％.对液氮冻存10d后的细胞进行体外培养,培养4d后,海藻酸微囊包埋冻存组能形成典型的精原干细胞簇.进行细胞免疫荧光鉴定,发现在微囊包埋冻存10d后CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1均显示阳性.海藻酸微囊的应用显著提高了绵羊SSCs的冷冻保存效率,且对绵羊SSCs的标记基因表达无显著影响.该方法的建立为其他家畜及濒危动物种质资源保存提供了依据.

关键词：海藻酸微囊、绵羊精原干细胞、冷冻保存、活率

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资助基金：教育部创新团队计划子课题IRT0833;高等学校博士学科点博导类基金项目20101501110001资助的课题;the Ministry of Education Innovation Team Plans Sub-topicsGrant IRT0833;Ph.D.Doctoral Program of Higher Class FoundationGrant 20101501110001

在线出版日期：2013-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1603-1609