融合蛋白lhFVⅡ-LDM的制备及其对乳腺癌细胞的抑制作用

摘要：

该文主要研究了强化融合蛋白lhFVⅡ-LDM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用.通过PCR和重叠PCR的方法构建了pET 19b-lhFVⅡ-LDP表达载体,重组质粒转化BL21,经IPTG诱导后表达并用Co2+亲和层析纯化lhFVⅡ-LDP融合蛋白,Western blot检测融合蛋白的正确性,再通过分子重组的方法将lhFVⅡ-LDP与力达霉素(LDM)的活性发色团(AE)组装成为强化融合蛋白lhFVⅦ-LDM.通过免疫共沉淀实验鉴定lhFVⅦ-LDP与组织因子(TF)的特异性结合作用,利用平板克隆形成实验观察lhFVⅦ-LDM对细胞增殖的影响,采用Hoechst33342染色检测IhFVⅦ-LDM诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况,建立了人乳腺癌裸鼠肿瘤模型,研究lhFⅥ-LDM对MDA-MB-231肿瘤生长的抑制作用.结果显示,lhFVⅦ-LDM强化融合蛋白在体外能很好的诱导MDA-MB-231细胞凋亡,动物实验结果表明,强化融合蛋白对MDA-MB-231肿瘤的生长具有显著的抑制作用.

关键词：凝血因子VⅦ、LDM、肿瘤抑制、MDA-MB-231细胞、表达纯化

所属期刊栏目：33

分类号：Q279(细胞生物物理学)

资助基金：《重大新药创制》国家科技重大专项课题基金2009ZX09103

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：976-982