牛胚胎滋养层巨细胞的体外分离培养

摘要：

建立牛胚胎滋养层细胞的体外分离、培养方法.取怀孕牛45～60天的完整子宫,无菌条件下收集胚胎子叶,采用胶原酶消化方法分离细胞.将细胞随机分为两组,一组用差异贴壁法纯化滋养层细胞,另一组未纯化则用含15%胎牛血清和滋养层细胞生长添加剂(trophoblast growth supplement,TGs)的DMEM培养基培养细胞.采用台盼蓝和Hoechst 33342细胞染色液对细胞活力及形态学进行分析,采用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定.结果显示,本实验分离的细胞经台盼蓝染色后记录细胞存活率大于90%,核染可见典型双核特征.纯化组细胞经差异贴壁法纯化后双核滋养层巨细胞(binucleate trophoblast giant cells,TGC)纯度可达95%,未纯化组细胞中TGC只占45%～50%左右.抗细胞角蛋白抗体检测呈阳性.抗波形蛋白抗体检测呈阴性.细胞经过4次传代后,可以存活60天.本试验成功建立了一种快速、简便、能够培养高纯度牛胚胎滋养层细胞的方法,为进一步研究滋养层细胞与相关病原侵入机制打下了基础.

关键词：细胞培养、牛、滋养层巨细胞

所属期刊栏目：31

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国际科技合作重点项目2006DFA33740

在线出版日期：2009-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：585-588