10.3969/j.issn.1674-7666.2003.03.012
绿色荧光蛋白与人肾脏NaDC3融合基因的构建及其在肾小管上皮细胞中的定位
本文采用RT-PCR方法从人的正常肾组织中扩增出hNaDC3基因全长cDNA序列,采用基因重组技术将hNaDC3基因和绿色荧光蛋白基因融合,通过真核表达质粒-脂质体介导,导入LLC-PK1细胞系,激光共聚焦显微镜动态观察GFP-hNaDC3的定位情况.结果显示pEGFP-C3空白质粒转染的LLC-PK1细胞表达了GFP,GFP在胞内分布以核浆为主,呈均匀致密的细颗粒荧光,胞核染色强,核仁荧光稀少,界线清楚.而pEGFP-C3-hNaDC3转染细胞株的绿色荧光蛋白,转染后第1天混合分布于细胞浆和细胞膜,以粗颗粒荧光为主,两者界限不清楚,胞浆中可见未染色的圆形空洞,未见胞核染色;第3天主要聚集于细胞膜,核周的胞浆中可见粗颗粒荧光物质,胞浆和胞膜界线清楚,胞核亦未见绿色荧光蛋白;第5天清晰聚集于细胞膜,细胞膜连接呈网状.因此hNaDC3蛋白在细胞质中生成后,定位于细胞膜并稳定表达.
人钠/二羧酸协同转运蛋白-3、绿色荧光蛋白、融合基因
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Q5(生物化学)
国家重点基础研究发展计划973计划G2000057000;国家自然科学基金30121005;国家自然科学基金30270505
2006-09-04(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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170-174