鱼类致病荧光假单胞菌外膜蛋白LolB多克隆抗体制备、鉴定与免疫活性分析

摘要：

以荧光假单胞菌的外膜蛋白LolB为研究对象,评价其免疫学功能.生物信息学分析各菌株间LolB的亲缘关系;分子克隆构建LolB蛋白的表达菌株并确定最佳诱导表达条件;SDS-PAGE切胶纯化LolB蛋白并免疫红鲫,Western blotting检测红鲫LolB血清的特异性与效价,ELISA体外模拟红鲫LolB血清与荧光假单胞菌的相互识别作用,免疫因子(ACP、AKP、LZM、IgM)与细胞吞噬作用测定,抗氧化因子(CAT、SOD、MDA、GSH-Px)、炎症因子(IL-1β、TNF-a)表达分析及组织病理学探究LolB蛋白的免疫保护作用.结果显示,LolB在假单胞菌属间同源性和亲缘性更近,LolB抗血清可能提供交叉免疫保护作用.原核表达纯化LolB蛋白,获得最佳诱导表达条件.红鲫LolB抗血清具有较好特异性,效价达1:200;且抗血清与荧光假单胞菌在体外存在相互识别作用;免疫因子以及细胞吞噬作用均呈上升趋势,表明LolB激活红鲫的非特异性免疫.红鲫免疫LolB蛋白攻毒荧光假单胞菌后,抗氧化因子以及炎症因子呈下降趋势,表明LolB蛋白具有抗氧化和消炎作用;组织病理学切片显示LolB蛋白保护红鲫的肾脏、脾脏、肠道的完整性.荧光假单胞菌LolB具有良好的免疫原性,有望成为渔用疫苗的候选抗原.

关键词：荧光假单胞菌、外膜蛋白LolB、主动免疫、组织病理学、红鲫

所属期刊栏目：32

分类号：S852.4;R392;Q785

在线出版日期：2023-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：1521-1533