新疆野生核桃JfDREB1A基因的克隆与原核表达分析

摘要：

为探究DREB1A基因在新疆野生核桃响应低温胁迫中的作用及表达特性,以新疆野生核桃群体中的'小矩圆'类型为试验材料,根据同源克隆的方法得到JfDREB1A基因的cDNA全长序列,利用荧光定量PCR检测其在低温胁迫条件下的表达水平;将该基因片段重组到pET-28a(+)原核表达载体上,转化到大肠杆菌(DE3)感受态细胞中诱导表达.结果表明,获得了新疆野生核桃中的DREB1A,将其命名为JfDREB1A,该基因的开放读码框长度为645 bp,具有典型的DREB1/CBF转录因子结构特征,JfDREB1A蛋白与其他植物DREB1蛋白具有高度保守性,与核桃亲缘关系最近.RT-PCR分析显示在4 ℃低温胁迫下,JfDREB1A基因的表达量迅速上调,8 h时达到最大.成功构建了 pET-28a-JfDREB1A重组表达质粒,得到大小约为29 ku的融合蛋白,与预测蛋白大小相符,该蛋白在大肠杆菌中最佳诱导条件是诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导 2 h.

关键词：新疆野生核桃、JfDREB1A基因、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：32

分类号：S852.65;Q786;S512

资助基金：国家自然科学基金;中央引导地方科技发展专项

在线出版日期：2023-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1050-1057