小麦酵母双杂交文库构建及文库质量的鉴定

摘要：

以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25d的籽粒为材料,利用Gateway技术构建中国春小麦cDNA初级文库和次级文库,由次级文库质粒转化Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库.通过mat-ing 法筛选小麦粒质量基因 TaDAR1的互作蛋白,以此来鉴定文库的有效性.结果表明:初级文库容量为1.82×107 CFU/mL、次级文库的容量为1.91×107 CFU/mL,文库重组率均大于96％,插入片段平均长度在1 000 bp以上.酵母双杂交文库转化效率为1.97×105 CFU/μg,文库容量为2.04×107 CFU/mL.构建诱饵载体pGBKT7-TaDAR1并转化Y2H酵母菌株,经检验存在自激活现象,进一步截断检测发现此蛋白N端无自激活,C端有自激活,以BD-TaDAR1-N为诱饵载体,筛选酵母文库,获得其互作蛋白序列,并命名为Ta-DAR1IP,经回转验证TaDAR1-N与TaDAR1IP存在相互作用关系.表明本试验方案构建的酵母文库是高质量的有效的.为初学者构建酵母双杂文库及使用"mating"法筛选酵母文库提供借鉴,也为后续小麦基因功能的研究奠定基础.

关键词：小麦、酵母双杂交文库、自激活检测、文库筛选

所属期刊栏目：31

分类号：S512.1(禾谷类作物)

资助基金：陕西省农业协同创新与推广联盟重大科技项目;西北农林科技大学实验技术研究与实验室管理创新项目

在线出版日期：2022-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：948-957