板栗铁型超氧化物歧化酶基因(CmFeSOD)的克隆及原核表达

摘要：

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切.根据板栗(Castanea mollissima Bl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST序列设计PCR扩增引物,以板栗幼叶的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得CmFeSOD基因cDNA序列,通过生物信息学方法分析该基因的cDNA序列,并推定其氨基酸序列,同时将该基因片段连接到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21 (DE3)并进行不同条件的诱导表达.结果 表明,板栗CmFeSOD基因开放阅读框(ORF)大小为705 bp,共编码234个氨基酸,推测其蛋白分子质量为26.016 5 ku,理论等电点(pI)为6.86,具有FeSOD家族的特征基序和保守结构域,Gen-Bank登录号为KY312852.遗传进化分析表明,板栗CmFeSOD与核桃的亲缘关系最近.SDS-PAGE电泳分析表明,通过原核表达获得CmFeSOD蛋白的分子质量约为29 ku,CmFeSOD蛋白在30℃,添加0.4mmol/L IPTG,诱导6h表达量最高,主要以包涵体的形式存在.

关键词：板栗、超氧化物歧化酶、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：28

分类号：S763;Q786(森林保护学)

资助基金：国家自然科学基金31400547;四川省科技计划19ZDYF2270

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：935-944