酵母双杂交筛选与小鼠维生素D受体互作的蛋白

摘要：

通过酵母双杂交实验技术筛选小鼠VDR相互作用的蛋白质,评价不同蛋白与VDR的结合活性,以期获得基于互作影响雄性生殖能力基因.扩增小鼠VDR完整CDS序列,克隆至诱铒表达载体pGBKT7,经菌落PCR、DNA测序鉴定,获得重组载体pGBKT7-VDR.随后将重组载体转化至酿酒酵母AH109,并进行毒性和自激活检测;然后与含小鼠cDNA文库的Y187酵母杂交,获得阳性克隆,经HindⅢ酶切,测序分析VDR互作候选蛋白的核酸序列,再检测β-半乳糖苷酶活性,评价候选蛋白与VDR作用力的强弱.结果表明,从小鼠cDNA文库中获得12个与VDR互作的候选蛋白.初步检测到12个蛋白可能与VDR互作,其中3个蛋白因子可能与VDR结合并调控蛋白激酶磷酸化或去磷酸化以影响精子形成、发育和精子活力.

关键词：维生素D受体、酵母双杂交、蛋白互作、雄性生殖

所属期刊栏目：27

分类号：Q74(生物小分子的结构和功能)

资助基金：陕西理工大学人才启动基金SLGQD2017-10;陕西省农业科技创新与攻关2016NY-084;陕西理工大学研究生创新基金SLGYCX1725

在线出版日期：2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1235-1245