β-伴大豆球蛋白α'-亚基的基因克隆及原核表达

摘要：

为制备N-连接糖基缺失的重组β-伴大豆球蛋白α'-亚基,以‘鲁96150’大豆种子为原料提取总RNA,经RT-PCR一步法获得‘鲁96150’大豆的全长cDNA,采用自行设计的引物F1/F2扩增得到目的基因α',与pGEM-T easy载体相连构建重组克隆载体pGEM-α',经Xho Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切得到目的基因与载体pET-28a连接构建重组原核表达载体pET-28a-α',将经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确的表达载体转入感受态细胞E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白α'-亚基.对重组α'-亚基的诱导表达条件进行筛选,发现在菌液OD600值为0.8、诱导温度30℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L的诱导条件下诱导9h后α'-亚基的表达量较高,重组α'-亚基的分子质量大小约为70 ku;工程菌pET-28a-α'-BL21经超声破碎、离心后发现重组α'-亚基部分存在于上清液中,部分形成包涵体蛋白.重组α'-亚基的克隆及表达为β-伴大豆球蛋白结构及功能特性的研究奠定基础.

关键词：β-伴大豆球蛋白、亚基、重组蛋白、克隆、基因表达

所属期刊栏目：26

分类号：TS201(食品工业)

资助基金：中日合作项目K332021107.Sino Japan Cooperation ProjectK332021107

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：304-310