籽用西瓜SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

摘要：

采用L25(56)正交试验设计,对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的5个因素(Taq酶用量、Mg2浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了籽用西瓜SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTPs 0.15 mmol·L-1、Taq酶1.5U、引物0.5μmol· L-1、模板DNA 20 ng,总体积20μL.比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,Taq酶用量的影响最小.应用22个籽用西瓜品种验证该体系稳定可靠,并从41个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的22个引物,并逐一筛选出最适退火温度.该反应体系的建立为今后利用SCoT标记技术对籽用西瓜种质遗传多样性评价、指纹图谱构建、种质鉴定、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段.

关键词：籽用西瓜、SCoT-PCR、体系优化、正交设计

所属期刊栏目：25

分类号：S651(瓜果园艺)

资助基金：内蒙古自然科学基金2016MS0356;内蒙古科技计划项目20090707,2010704,20110711,20120212;内蒙古高寒地区高产安全蔬菜生产的研究与创新项目NDPYTD2013-3;Inner Mongolia Natural Science2016MS0356;Science and Technology Plan Projects in Inner Mongolia20090707,2010704,20110711,20120212;Alpine Region of Inner Mongolia High Security Research and Innovation of Vegetable ProductionNDPYTD2013-3

在线出版日期：2016-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：889-896