PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichum fructicola原生质体转化

摘要：

为建立PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichum fructicola的遗传转化体系,以果生刺盘孢SQ06-E的幼嫩菌丝为受体,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素标记的质粒pCB1003转入果生刺盘孢菌丝的原生质体中;对获得的转化子进行遗传稳定性检测、PCR检测和Southern杂交分析.试验获得果生刺盘孢的最优转化体系为:密度为1×106 mL-1分生孢子在M3S培养基中,28℃、200 r/min震荡培养8 h;过滤收集菌丝,在质量浓度为0.25 g/mL崩溃酶+0.05 g/mL溶壁酶的10 mL酶解液中加入0.5g湿菌体酶解3 h;整个试验的渗透压稳定剂为0.8 mol/L KC1.试验共得到76个转化子,转化率为1μg DNA获得3～4个转化子.对转化子的PCR检测和Southern杂交分析都表明hph基因已整合入果生刺盘孢的基因组中.所有转化子在PDA培养基上继代5次后仍能正常生长,说明外源基因hph能在果生刺盘孢中稳定遗传.

关键词：苹果炭疽叶枯病、遗传转化、转化子鉴定

所属期刊栏目：25

分类号：S582.28;S432.1(野生植物)

资助基金：国家自然科学基金31171797.The National Natural Science Foundation of China 31171797

在线出版日期：2016-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：442-449