异子蓬异型种子萌发基因差显的cDNA-AFLP技术体系优化
以异子蓬种子为材料,建立并优化其萌发过程中基因表达差显的cDNA-AFLP技术体系.分别以总RNA和mRNA反转录的双链cDNA为模板,对25 μL PCR扩增体系中的退火温度、引物量、DNA聚合酶种类及电泳条件进行优化.结果显示,以分离的mRNA为模板可以反转录得到品质较好的双链cDNA; PCR扩增选择较高退火温度(第1轮为56℃,第2轮为65~56℃)、引物量为1μL(10 μmol/L)、使用高效Premix LA Taq Hot Start DNA聚合酶、在约800 V电压下进行60 g/L变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,可得到条带清晰、多态性好的cDNA-AFLP结果.
异子蓬、异型种子、萌发、cDNA-AFLP技术
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Q781(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金31060027,31260037;新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金XJDX0201-2011-03
2015-12-16(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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