新疆卡拉库尔羊Fas基因原核表达载体的构建及表达

摘要：

根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物,将EcoR Ⅰ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端,同时加上保护性碱基.利用RT-PCR技术,从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段.将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接,利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选,然后进行序列测定.使用原核表达载体pET28a来完成Fas的定向克隆,成功构建重组融合表达质粒pET-28a-Fas,然后将质粒转化至E.coli BL21感受态,设置不同IPTG浓度和诱导温度,选择最佳的表达条件,然后初步纯化重组融合蛋白.结果表明,在pET28a表达载体中,Fas基因的插入方向和读码框均正确;同时Fas基因也完成在E.coli BL21融合表达的日的,融合蛋白分子质量为39.7 ku.

关键词：卡拉库尔羊、Fas基因、原核表达

所属期刊栏目：22

分类号：S436.68+4(病虫害及其防治)

资助基金：新疆建设兵团应用基础项目07GC07

在线出版日期：2015-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6-9