绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达
根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体.测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699 bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95％以上.SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60 ku,与预期蛋白大小一致.Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白.说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白.
绵羊、Noggin基因、序列分析、原核表达
21
S813.3(普通畜牧学)
转基因生物新品种科技培育重大专项2009ZX08008-002B
2015-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1-7
