人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用

摘要：

利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP).以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台.以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白；然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90％的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割.

关键词：开源式方法、锌指蛋白、细菌双杂交、锌指核酸酶

所属期刊栏目：21

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：农业部转基因重大专项2009ZX08010-023B

在线出版日期：2012-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1-10