PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达

摘要：

克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因,并进行序列分析及原核表达.根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因 ORF5,将其克隆入 pGEM-T载体中,进行测序及序列分析.再设计另外1对引物扩增 ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的 ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌 BL21中进行原核表达.结果扩增到603 bp的PRRSV全长 ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%.因此推测陕西分离株属于北美型.SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在.Western-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、陕西分离株、ORF5、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：19

分类号：R446.5(诊断学)

资助基金：陕西省科技攻关项目2009K02-01;国家大学生创新性实验计划项目;教育部新世纪优秀人才支持计划NCET-07-0701

在线出版日期：2010-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6