芸芥柱头总RNA提取方法及自交亲和性相关基因mRNA差异显示分析体系研究

摘要：

以芸芥自交亲和系为材料,用改进异硫氰酸胍法提取芸芥柱头总RNA.所提取的RNA完整性好、没有DNA和蛋白质等污染,完全适用于后继实验.同时对影响DDRT-PCR扩增的参数进行了筛选研究,确定了Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶的浓度和扩增程序.结果表明,在25μL DDRT-PCR反应总体系中各组分的最佳量分别为:17.2μL DEPC-ddH2O;1.5μL10×PCR Buffer(Mg2+);2.0μL dNTP(各2.5mmol/L);1.0μL锚定引物H-T11 M(10 μmol);1.0μL随机引物(5μmol/L);1.5μL cDNA;0.8 μL TaqDNA Polymerase(2.5 U/μL).PCR反应程序:①94℃4 min;②30℃1 min 30 s;③72℃1 min;④94℃30 s;⑤42℃1min 30 s;⑥72℃1 min;从④到⑥35个循环;⑦72℃10 min.

关键词：芸芥、提取方法、DDRT-PCR、反应体系

所属期刊栏目：18

分类号：S565.4(经济作物)

资助基金：芸芥自交亲和基因的克隆及功能分析项目3ZS061-A25-076

在线出版日期：2009-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：140-143