人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法

摘要：

构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒(PGCl-collagen).利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以末转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGCl-collagen作为阳性对照组对转染的细胞进行PCR验证.结果显示:在6孔培养板中细胞融合度达到50%～60%左右介导1～3μg重组质粒转染24 h,转染效率可达25%～30%,筛选单克隆细胞在荧光显微镜观察检测到绿色荧光蛋白的表达.在使用800U的G418筛选效果最好,维持浓度300～600U,获得25个稳定表达的阳性细胞系.从中选取6个克隆进行PCR验证.成功利用脂质体转染方法将人I型胶原基因成功转染到荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,PCR验证结果正确.

关键词：胶原基因、转染、成纤维细胞、阳性克隆

所属期刊栏目：18

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30471242

在线出版日期：2009-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：10-16