10.3969/j.issn.1004-1389.2005.02.003
mRNA差异显示技术的研究进展
针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述.①采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20 bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT-PCR的体系的扩增特异性更一致.②针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法.③保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数.①用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进.
mRNA差异显示技术、引物的设计、非放射性标记、假阳性
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Q781(基因工程(遗传工程))
湖南省杰出青年科学基金03JJY1004;中国科学院知识创新工程项目KZCX3-SW-434
2005-06-16(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
9-12,43