牛金属硫蛋白素bMTcin编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究

摘要：

以本实验室由RT-PCR扩增得到的含有牛金属硫蛋白(bMT)cDNA的重组质粒pYJ101为模板,PCR扩增出牛金属硫蛋白素bMTcin的编码区,将其克隆到pGEM-T载体上并进行DNA序列测定.利用融合表达载体pGEX4T-1,在E.coli中诱导表达bMTcin,经过Glutathine Sepharose 4B亲和层析纯化后,SDS-PAGE检测GST:bMTcin的条带.结果表明,所克隆的bMTcin序列全长为141bp,其DNA序列与原模板中的序列完全相同,与GenBank中另外5个bMTcin DNA相比,第31位和86位与ConneeIy的序列为A和G,导致第11位(Thr)和29位(Arg)的氨基酸不同于其他4个序列(11位为Ala,29位为Lys).融合表达产物亲和层析纯化后,用SDS-PAGE检测可见融合蛋白GST : bMTcin的条带,紫外分光光度计测定,融合蛋白GST:bMTcin的表达量大约为1.1 mg/L发酵液.

关键词：牛金属硫蛋白素bMTein、PCR、pGEM-T载体、基因克隆、DNA序列分析、pGEX4T-1、大肠杆菌、亲和层析、SDS-PAGE、GST:bMTcin

所属期刊栏目：11

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：28-31,87