奶山羊IL-6与TGF-β1融合蛋白的制备及其活性检测

摘要：

[目的]制备具有免疫活性的奶山羊白细胞介素6 (Interleukin-6,IL-6)与转移生长因子-β1(Transfer growth factor-β1,TGF-β1)融合蛋白.[方法]采集奶山羊外周血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),将PBMCs用刀豆蛋白A(ConA)刺激后提取其总RNA,RT-PCR扩增IL-6与TG F-β1基因,构建其克隆载体及原核表达载体pET-32a-TGF-β1和pET-32a-IL-6,然后进行PCR和测序鉴定.将原核表达载体pET-32a-TGF-β1和pET-32a-IL-6转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,以镍柱纯化试剂盒纯化IL-6与TGF-β1重组蛋白,对表达产物和纯化后的蛋白进行SDS-PAGE.用纯化的IL-6、TGF-β1蛋白刺激PBMCs,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因为内参,采用qRT-PCR法检测PBMCs IL-17 mRNA的表达量.[结果]RT-PCR扩增获得了627 bp的IL-6基因片段和1 137 bp的TGF-β1基因片段,成功构建了IL-6和TGF-β1基因的克隆载体及pET-32a-TGF-β1和pET-32a-IL-6原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到成功表达;获得了纯化的奶山羊IL-6与TGF-β1融合蛋白,该融合蛋白联合刺激能使PBMCs的IL-17 mRNA表达水平显著升高.[结论]获得了具有免疫活性的奶山羊IL-6与TGF-β1重组蛋白.

关键词：奶山羊、白细胞介素6、转移生长因子-β1、融合蛋白

所属期刊栏目：47

分类号：S858.275.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：青海省重点研发与转化计划项目NMSY-2018-07;咸阳市重大科技专项2017K01-34;陕西省重点产业创新链项目2018ZDCXL-NY-01-06

在线出版日期：2019-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-7,15