犬埃立克体多表位融合抗原蛋白的免疫学特性研究

摘要：

[目的]构建和制备具有较强抗原性的犬埃立克体(Ehrlichia canis)重组蛋白并研究其免疫学特性.[方法]利用ABCpred等在线软件预测分析犬埃立克体gp19、gp140和gp200等蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合抗原基因E.canis-megp 19及E.canis-megp-1,经PCR扩增后将其克隆至表达载体pET 32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET-32a(+)-E.canis-megp-1,经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定正确后转化至感受态细胞大肠杆菌BL21 (DE3)中,优化表达条件(IPTG诱导浓度、温度及时间),表达重组蛋白后检测其免疫原性.[结果]成功构建并合成了多表位融合抗原基因E.canis-megp 19和E.canis-megp-1,其PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶电泳后分别出现大小为414和429 bp的片段;重组载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET 32a(+)-E.canis-megp-1双酶切后得到了预期长度的目标片段;SDS-PAGE结果显示,当加入1.0 mmol/L IPTG、37℃诱导8h后,E.canis-megp19及E.canis-megp-1重组蛋白均可大量表达,其分子质量分别为38和39 ku;Western blot分析显示,该重组蛋白可被犬埃立克体阳性血清特异性识别,证实其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明,该重组蛋白可诱导机体产生特异性抗体.[结论]制备的多表位融合重组蛋白能够高效地在大肠杆菌中表达且能够诱导机体产生特异性抗体.

关键词：犬埃立克体、gp19、gp140、gp200、多表位融合抗原基因

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分类号：S852.64(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家十三五重点研发计划子课题2016YFD0501005;兵团中青年科技创新领军人才计划项目2016BC001

在线出版日期：2018-10-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：11-19