嗜水气单胞菌菌蜕系统的构建及其免疫效果研究

摘要：

[目的]探讨鱼源嗜水气单胞菌菌蜕系统的可行性和应用性.[方法]以PhiX174基因组DNA为模板,对LysisE基因进行PCR扩增,并将纯化的PCR产物与原核表达载体pBV220双酶切后连接,构建溶菌质粒pBV220-LysisE.将pBV220-LysisE转入嗜水气单胞菌LN0925株中,构建LN0925 (pBV220-LysisE)菌蜕疫苗(AHGs),进而通过溶菌动力学过程检测、电镜下细菌形态观察和动物免疫保护试验等评价所制备的菌蜕疫苗.[结果]PCR扩增成功获得长度为276 bp的噬菌体LysisE基因;成功构建pBV220-LysisE重组质粒及AHGs.在42℃诱导60 min后,LN0925 (pBV220-LysisE)菌株开始出现溶菌现象,至3h后溶菌基本结束;溶菌至210 min时,其裂解效率达到99.99％.菌液浓度对菌蜕裂解效率的影响试验表明,不同浓度质粒pBV220-LysisE均可以高效诱导嗜水气单胞菌LN0925株裂解.电镜观察发现,AHGs形成明显的溶菌孔道,整体细胞形态完好,且内容物流失.动物免疫保护试验结果表明,AHGs疫苗能明显提高鲤鱼的血清抗体水平,在免疫后5-6周血清抗体凝集效价达到1∶256,从第7周开始呈下降趋势;AHGs和甲醛灭活疫苗(FKC)的相对保护率分别为77.78％和55.56％.[结论]AHGs能够有效激活鱼体的免疫系统并产生免疫保护,且较FKC具有更好的免疫保护效果.

关键词：嗜水气单胞菌、菌蜕、pBV220-LysisE、免疫保护

所属期刊栏目：44

分类号：S942.5(水产保护学)

资助基金：“十二五”国家科技支撑计划项目2012BAD25B10;中国水产科学研究院基本科研业务费项目2014A06XK05;黑龙江省自然科学基金面上项目C201140

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：17-23