PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备

摘要：

[目的]制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体.[方法]提取PAM细胞总RNA,通过RT-PCR方法获得CD163 SRCR5-SRCR6(第1 417～2 136 bp,共720个bp)基因,将其克隆到pET-28a(+)载体上,构建重组表达载体pET-28a(+)-CD163,经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌,在BL21 (DE3)中诱导重组目的蛋白表达,然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价,并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞的活性.[结果]克隆了720 bp的CD163 SRCR5-SRCR6基因,成功构建了pET-28a(+)-CD163重组表达载体;SDS-PAGE结果表明,CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白被成功诱导并以包涵体形式表达;Western blot结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性,间接ELISA方法测得免疫Balb/c小鼠制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体效价可达105;IFA试验结果显示,制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体可与Marc-145细胞结合,且在1∶20、1∶40倍稀释时,能部分阻断高致病性PRRSV SD16毒株感染Marc145细胞.[结论]用大肠杆菌原核表达系统成功诱导表达了CD163 SRCR5-SRCR 6重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得了高效价多克隆抗体,其可以结合细胞并阻断PRRSV感染细胞.

关键词：PRRSV、CD163、CD163 SRCRS-SRCR6重组蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65+1;S852.4+3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目U0931003/L01;国家“863”高技术研究发展计划项目2011AA10A208

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-6,14