微小隐孢子虫cDNA文库的构建与免疫学筛选

摘要：

[目的]构建微小隐孢子虫cDNA文库,以筛选出可替代天然抗原用于诊断的重组抗原.[方法]首先纯化微小隐孢子虫卵囊,用Trizol Reagent提取总RNA,构建全长cDNA;分别用蛋白酶K与Sfi消化、酶切处理cDNA,采用Column Spin H-1000分离柱分离cDNA,连接λTriplEx2载体,构建cDNA文库.扩增cDNA文库,用兔抗微小隐孢子虫血清作探针对cDNA文库进行初筛和复筛,将复筛得到的阳性克隆连接PMD18-T载体,测序后进行序列比对.[结果]微小隐孢子虫cDNA文库噬菌斑插入片段长度为1.5 kb左右,库容大于107.经过筛选共获得了20个微小隐孢子虫阳性克隆,测序后从中选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,分别为MUCIN蛋白、乳酸脱氢酶、微管相关蛋白和子孢子抗原蛋白.[结论]成功构建了微小隐孢子虫cDNA文库,并筛选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,为隐孢子虫的血清学诊断提供了重组抗原.

关键词：微小隐孢子虫、cDNA文库构建、免疫学筛选

所属期刊栏目：41

分类号：S852.72+3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家"十一五"传染病重大专项2008ZX10004-011;国家自然科学基金项目31025025,31272549

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-12