大鲵胸腺素β-4全长基因的分离与表达研究
[目的]对大鲵胸腺素β-4基因进行生物信息学分析和原核表达载体构建,为大鲵胸腺素β-4蛋白生理活性的深入研究奠定基础.[方法]从大鲵皮肤cDNA文库中分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长序列,采用多种生物软件对其进行生物信息学分析,用定量PCR研究胸腺素β-4基因在不同组织的表达情况,并以pET32a为载体构建该基因原核表达载体.[结果]胸腺素β-4基因全长共699 bp,其中开放阅读框135 bp,5’-UTR 87 bp,3'-UTR为474 bp,该基因编码45个氨基酸,表达蛋白的理论分子质量为5 141.59 u,等电点为5.34;结构分析发现,大鲵胸腺素β-4蛋白氨基酸序列的第7～43位处有“THY”特征模体,没有跨膜螺旋区、细胞膜外在跨膜结构域.氨基酸序列进化关系表明,大鲵与人、大鼠、牛、猩猩、鸡、倭蛙等动物亲缘关系较近,氨基酸同源性高于85％；与猪和爪蟾的亲缘关系次之,氨基酸同源性均为83％；而与虹鳟、大菱鲆、斑马鱼等鱼类的亲缘关系较远,氨基酸同源性低于80％.荧光定量PCR检测结果表明,胸腺素β-4基因在大鲵肺中的相对表达量最高.SDS-PAGE电泳结果表明,构建的大鲵胸腺素β-4原核表达重组菌株pET32a-Tβ4,在37℃条件下,用终浓度1.0 mmol/mL IPTG诱导4h后,大鲵胸腺素β-4基因获得了较高的表达.[结论]分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长cDNA序列,该基因氨基酸序列与人等高等动物的同源性最高,能在大鲵肺中及大肠杆菌中获得高效表达.
大鲵、胸腺素β-4基因、分离与表达
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Q786;S917(基因工程（遗传工程）)
陕西省农业科技攻关项目2012K01-18;西北农林科技大学基本科研业务费专项QN2011062;西北农林科技大学后稷学者专项Z11021007
2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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