猪囊尾蚴TsCL-1基因的原核表达

摘要：

[目的]探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1蛋白的生物学特性,为研究半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础.[方法]将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转入大肠杆菌BL21进行表达,诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽(GST)-琼脂糖亲和层析法进行纯化,纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测.[结果]经SDS-PAGE分析显示,猪囊尾蚴TsCL-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61 ku,表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4 %.表达产物应用GST琼脂糖凝胶纯化后,纯化蛋白的纯度可达90%以上.明胶蛋白电泳结果显示,纯化蛋白对明胶具有水解活性,并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64抑制.[结论]从重组菌中成功表达了目的蛋白,该蛋白具有明显的水解活性,且E-64对其水解活性有抑制作用.

关键词：猪囊尾蚴、半胱氨酸蛋白酶、TsCL-1基因、原核表达、纯化、水解活性

所属期刊栏目：38

分类号：S852.73+4;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高科技研究发展计划"863"项目2006AA10A207

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：15-18,26