猪瘟流行毒株E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

摘要：

[目的]表达猪瘟保护性抗原E0蛋白,用以建立猪瘟抗体检测方法,为进一步开发诊断试剂盒和研究EO蛋白的免疫学功能奠定基础.[方法]将猪瘟野毒株FJ237-E0基因插入原核表达载体pET32a中,以BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,将表达的重组蛋白通过His亲和层析柱进行纯化,以纯化的His-E0融合蛋白作为诊断抗原,通过探索抗原包被量和抗体血清稀释倍数.建立检测猪瘟EO抗体的ELISA方法.[结果]成功克隆了CSFV E0基因,其核苷酸序列为687 bp,编码229个氨基酸.经His亲和层析柱纯化检测纯度为0.587 mg/mLiSDS-PAGE电泳结果显示,表达的E0蛋白分子质量约为50.3 ku.表达的重组蛋白为可溶性蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,ELISA方阵确定的最佳抗原包被量为100 ng,血清稀释倍数为1:30,建立的ELISA方法与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的阳性符合率为92.3%,阴性符合率为85.7%.[结论]建立的ELISA检测方法,不但为猪瘟抗体监测提供了一种比较实用的血清学监测手段,也为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定了基础.

关键词：E0基因、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：36

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业部动物疫情防制与监测项目NY200609-03

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28