免疫荧光法检测融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD在人星形胶质细胞中穿膜能力及保护作用

摘要：

目的 观察蛋白质转导4型-铜,锌超氧物歧化酶融合蛋白(protein transduction domain4-cuprum,zinc superox-ide dismutase fusion protein,PTD4-Cu,Zn-SOD)能否穿膜进入体外培养的人星形胶质细胞,能否在穿膜后仍保持其生物学活性,能否减轻人星形胶质细胞的缺氧损伤.方法 免疫组化及荧光法观察融合蛋白穿膜后在人星形胶质细胞内的荧光分布情况,评估融合蛋白的穿膜能力;制备人星形胶质细胞缺氧损伤模型后,实验分为空白对照组、Cu,Zn-SOD组、PTD4-Cu,Zn-SOD组.空白组加DMEM培养基(不含血清)作为对照,其余两组分别加入含有Cu,Zn-SOD、PTD4-Cu,Zn-SOD终浓度为2μmol/L的DMEM培养基,干预时间为1 h,用SOD活性及MDA含量测试盒,观察融合蛋白干预后的缺氧损伤星形胶质细胞中二者的变化.结果 FITC荧光标记的融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD可以进入体外培养的人星形胶质细胞中,且在细胞核中有聚集分布;经3组干预后,和对照组相比,PTD4-Cu,Zn-SOD组及Cu,Zn-SOD组均能提高星形胶质细胞内的SOD活性,融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD组提高星形胶质细胞内SOD活性更为明显.和Cu,Zn-SOD组、对照组相比,PTD4-Cu,Zn-SOD组能降低星形胶质细胞内的MDA含量.结论 PTD4-Cu,Zn-SOD能穿膜进入体外培养的人星形胶质细胞;融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD能增加人星形胶质细胞缺氧损伤后的SOD活性,降低MDA含量.

关键词：蛋白质转导超氧物歧化酶融合蛋白、穿膜能力、免疫荧光

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分类号：R319(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金No.81071070

在线出版日期：2023-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：309-314