硒蛋白S截短和全长重组质粒的构建与表达

摘要：

目的 构建截短和全长硒蛋白 S(SelS)重组体,以期在细胞系中或动物体内高表达并观察其生物学效应.方法 用基因重组技术构建SelS的截短体和全长的重组质粒,截短体基因只包含mRNA的编码序列(CDS),全长包括mRNA的CDS和3′非翻译区(UTR)序列,此序列中含硒代半胱氨酸的插入序列(SECIS).将重组质粒送公司测序并比对.用脂质体2000将硒蛋白SelS质粒转染至细胞中,24 h后观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞技术检测细胞的转染效率;收集细胞用Trizol法提取总RNA,将mRNA反转录为cDNA,以此为模板用PCR扩增以观察目的基因的表达.结果 测序结果显示重组序列与目的基因完全一致,质粒构建成功.显微镜下可观察到细胞高表达绿色荧光蛋白,经流式细胞技术验证细胞的转染效率达到40% 以上.PCR产物的凝胶电泳结果显示:与对照组及其他实验组相比,只有转染了目的基因的实验组高表达截短和全长的SelS基因.结论 成功构建SelS截短的和全长的重组质粒并转染入细胞中高表达,对观察硒蛋白截短体和完整形式在细胞系或动物体内的生物学效应提供了基础.

关键词：硒蛋白S、截短体、基因重组、质粒构建

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分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金资助81400740;西安交通大学校基金Xjj2014084;西安交通大学第二附属医院院基金资助[No.RCXM20140]Supported by the National Natural Science Foundation of China81400740;the Foundation of Xi'an Jiaotong UniversityXjj2014084;the Foundation of the Second Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong UniversityRCXM20140

在线出版日期：2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：276-280