磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体

摘要：

目的 考察磁珠固定多抗吸附细胞裂解液中酶/突变体,分析吸附酶活性对样品蛋白量响应曲线预测最大吸附活性(Vs)用于比较识别阳性突变体的可靠性.方法 纯化重组表达大肠杆菌碱性磷酸酶(ECAP)及绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(PAAS)为免疫原;兔抗血清用33％硫酸铵分级和DEAE-纤维素层析纯化得多抗.磁珠羧基活化后固定多抗;用对硝基酚显色底物,碱终止后测定405nm吸收增量反映酶活性;分析吸附响应曲线预测Vs.结果 多抗磁珠吸附酶的容量约2.0mg/g磁珠.ECAP比活性超过PAAS比活性70倍.ECAP突变体R168K较野生型比活性提高约50％,用2.5μg多抗磁珠反应10min即可预测Vs识别此阳性突变体;用PAAS突变体G138S为起始酶,用10μg多抗磁珠测定吸附酶反应20min后吸收预测Vs,能识别活性提高20％以上的PAAS弱阳性突变体.结论 只要被吸附酶活性能可靠测定,优化磁珠固定多抗的用量能预测低活性酶/突变体Vs进行比较识别阳性突变体.

关键词：多抗、突变体、最大吸附活性、预测、磁珠

所属期刊栏目：38

分类号：Q599

资助基金：国家863项目2011AA02A108;国家自然科学基金资助项目30672009,31570862;教育部博士点基金资助项目No. 20125503110007Supported by “863”Program of China2011AA02A108;the National Natural Science Foundation of China30672009,31570862;the Doctoral Program Funds of Education Ministry of China20125503110007

在线出版日期：2017-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：753-757,767