靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选

摘要：

目的：构建 V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体，以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用 Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫，分离血液中的淋巴细胞，利用噬菌体展示技术，构建噬菌体展示文库，经过连续3次生物淘筛获得与 Vsig4蛋白结合的噬菌体，经测序和基因比对所得 VHH 序列，用 ELISA法筛选出抗 Vsig4的高亲和力纳米抗体，并用 Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库，经过克隆筛选获得136个 Vsig4阳性单克隆，经测序获得15个不同的VHH 基因，将这些基因克隆至原核表达体系，表达和纯化后获得了高纯度的 Vsig4纳米抗体，其中 Nb119的亲和力最高，并且可以与 Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的 Vsig4纳米抗体，以期用于检测巨噬细胞表面 Vsig4的表达和构建特异性分子探针。

关键词：Vsig4、纳米抗体、噬菌体展示文库、生物淘筛、亲和力鉴定

所属期刊栏目：38

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金资助项目81501527;陕西省自然科学基础研究计划项目No.XJJ2015048 Supported by the National Natural Science Foundation of China81501527;the Natural Science Basic Research Program of Shaanxi ProvinceXJJ2015048

在线出版日期：2017-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-12