HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
目的:研究单独表达无功能的无义突变体 L539fs/47在 HEK293细胞中杂合状态下对野生型 HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型 HERG 及突变体 HERG-L539fs/47分别转染 HEK293细胞36 h 后,RT-PCR检测 HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测 HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测 IHERG电流密度。结果野生组 HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型 HERG蛋白多于突变体,野生型 HERG 蛋白主要分布在细胞膜上;而 HERG 突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型 HERG135 ku及155 ku 2个条带,突变体仅60 ku 1个条带。全细胞膜片钳检测 WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31 pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体 L539fs/47对野生型 HERG电流的不完全负显性抑制作用。
HERG、无义突变、不完全负显性抑制作用、HEK293 细胞
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R541.7(心脏、血管(循环系)疾病)
国家自然科学基金资助项目No.30800473 Supported by the National Natural Science Foundation of China 30800473
2016-06-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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