缺氧调控表达的 NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的：构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件(five copies of hypoxia responsive elements,5 HRE)的缺氧调控表达的神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的逆转录病毒载体。方法用 PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5 HRE 和人来源 NT-3片段克隆入逆转录病毒载体 pLNCX 中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒 pLNCX-5 HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经 PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒 RV-5 HRE-NT3；用逆转录病毒感染 NIH 3T3细胞48 h 后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5 HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒 RV-5 HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×106 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的 NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。

关键词：逆转录病毒载体、缺氧调控表达、神经营养因子-3

分类号：R338;R741.02(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81301041;陕西省青年科技新星项目2015KJXX-43;陕西省优势学科建设经费资助陕教办20143-1001;陕西省教育厅专项科研计划项目2013JK0756、14JK1614;青海省应用基础研究资助项目No.2013-Z-727 Supported by the National Natural Science Foundation of China81301041;Scientific Research Program Funded by the Depart-ment of Science and Technology of Shaanxi Province2015KJXX-43;the Leading Disciplines Development Government Founda-tion of Shaanxi[2014]3-1001;the Scientific Research Program Funded by Shaanxi Provincial Education Department2013JK0756,14JK1614;Basic Application Research Program Funded by Qinghai Science & Technology Department2013-Z-727

在线出版日期：2016-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：190-194