PPARγ及其辅激活子 MED1重组腺病毒的制备与生物学功能分析

摘要：

目的：制备大量 PPARγ与 MED1腺病毒,探讨其生物学功能。方法以实验室现有的腺病毒原液为材料,用HEK293a 细胞包装腺病毒,CsCl 梯度离心法纯化病毒,A260法测定病毒颗粒,并通过细胞感染、小鼠活体尾静脉注射病毒等实验,用 HE 染色法、Real-time PCR 及免疫组化法进一步鉴定病毒的生物学功能。结果获得 Ad/LacZ、Ad/PPARγ和 Ad/MED1,其浓度分别为2.51×1012、1.57×1012、2.59×1012 VP/mL。C57BL/6J 小鼠经尾静脉注射 Ad/PPARγ,小鼠出现脂肪肝,肝细胞聚集大量脂滴,且 PPARγ mRNA 和蛋白表达显著增加。同样,用 Ad/MED1感染3T3-L1细胞或给小鼠尾静脉注射 Ad/MED1,MED1表达水平都显著升高。结论 Ad/PPARγ、Ad/MED1及对照Ad/LacZ 成功制备,为体外细胞病毒感染以及活体研究 PPARγ与 MED1的基因功能以及网络调控奠定了实验基础。

关键词：PPARγ、MED1、重组腺病毒、CsCl 梯度离心

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金81200207;中央高校基本科研业务费专项资金资助Supported by the National Natural Science Foundation of China81200207;the Fundamental Research Funds for the Central Universities

在线出版日期：2015-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：294-298