含hITF基因cDNA的腺病毒载体的构建及其感染肠上皮细胞的研究

摘要：

目的 构建含有人肠三叶因子基因cDNA的腺病毒载体,并观察其对肠上皮细胞的感染能力.方法 利用PCR技术扩增hITF基因cDNA全长序列,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,内切酶PmeⅠ线性化后转染HEK293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定.将重组腺病毒感染肠上皮细胞(HT-29),荧光显微镜观察感染效果.结果 成功构建出重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hITF,Pme Ⅰ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,Pac Ⅰ酶切鉴定后命名为Ad-hITF;重组腺病毒载体在HEK293细胞中包装,获得重组腺病毒颗粒;根据Karbers公式计算病毒颗粒滴度为2×109 pfu/mL;重组腺病毒可以感染肠上皮细胞(HT-29),感染效率较高.结论 成功构建含hITF基因cDNA的重组腺病毒载体并获得大量子代重组腺病毒,为腺病毒介导hITF基因治疗的应用打下基础.

关键词：肠三叶因子、腺病毒、肠上皮细胞、基因治疗

所属期刊栏目：35

分类号：R379;R394.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81100252;南京军区医学科研课题重点项目12Z10 Supported by the National Natural Science Foundation of China81100252;the Scientific Research Funds of Nanjing Military Command12Z10

在线出版日期：2014-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：795-799