pEGFP-N1-TNFα表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建pEGFP-Nl-TNFα重组质粒并鉴定,为转导CIK细胞并定位表达奠定基础.方法 以pMD19 Simple T-TNFα为模板,PCR扩增TNFα CDS区片段,将PCR产物进行15 g/L琼脂糖凝胶电泳,并回收TNFα条带,用BglⅡ和HindⅢ将TNFa的PCR片段及目的载体pEGFP-N1双酶切,然后进行连接.连接产物转化至DH5α中.挑取克隆,提质粒,进行鉴定.结果 PCR扩增片段、双酶切出现722 bp大小的目的基因条带与预期结果相符；插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致.结论 成功构建了重组质粒pEGFP-N1-TNFα,为下一步用纳米材料转染CIK细胞的研究奠定了基础.

关键词：肿瘤坏死因子、真核表达载体、质粒pEGFP-N1、基因疗法、CIK细胞

所属期刊栏目：34

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：云南省社会发展科技计划应用基础研究项目,2009ZC119M;云南省卫生科技内设研究机构资助项目2011WS0068;云南省社会发展科技计划应用基础研究重点项目,2009CC026

在线出版日期：2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：263-266