pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表达质粒的构建及其在MCF-7乳腺癌细胞株中的表达

摘要：

目的 明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1( +)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达.方法 RT PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况；Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况.设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒.挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定.瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况.结果 ①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达；②pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定.

关键词：caveolin-1、真核表达质粒、真核细胞转染、乳腺癌细胞株

所属期刊栏目：34

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：中央高校基础研究基金项目2010;陕西省科技攻关项目2011K13-03-08

在线出版日期：2013-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：16-19