胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量研究

摘要：

目的 通过菲律宾菌素Ⅲ染色和脂质测定法,对胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的分布进行可视化与定量研究.方法 利用胆固醇荧光探针菲律宾菌素Ⅲ标记稳定表达phogrin-GFP的MIN6细胞,对比细胞内游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡的分布情况.通过连续蔗糖密度梯度离心法分离MIN6细胞中的胰岛素分泌囊泡,应用钼酸铵分光光度法和薄层分析法分别测定生物脂膜中磷脂和游离胆固醇含量,从而得到胆固醇所占比例.结果 MIN6细胞内菲律宾菌素Ⅲ标记的游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡在胞浆中的分布一致,主要聚集在核周及细胞膜下.此外,连续蔗糖密度梯度离心法分离胰岛素分泌囊泡层中富含胆固醇,该层游离胆固醇摩尔百分比为(48.62±3.28)mol％,高于其余各层的细胞器.结论 本研究首次进行了胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量测定,发现胰岛素分泌囊泡富含胆固醇,为进一步研究胆固醇对胰岛素分泌囊泡形成的影响提供了理论基础和方法学依据.

关键词：胰岛素、分泌囊泡、胆固醇、菲律宾菌素Ⅲ、蔗糖密度梯度离心

所属期刊栏目：32

分类号：R335.6(人体生理学)

资助基金：教育部留学回国人员科研启动基金资助项目2008;教育部博士点新教师基金200806981028;陕西省科技攻关项目2008K09-09

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：680-683