胃癌组织来源的突变型DNA聚合酶β的碱基切除修复功能
目的 研究胃癌组织中野生型和突变型DNA聚合酶β在DNA修复过程中的作用,为进一步探讨肿瘤的病因发病学奠定基础.方法 采用聚合酶链反应(PCR)和分子克隆技术,以野生型和突变型DNA聚合酶β基因为模板,扩增后构建pGEM-T-polβ克隆载体,经PCR筛选,亚克隆于pET28a(+)表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细菌,经诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达后,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白.设计3条单链DNA引物,退火合成含有单碱基缺失的DNA底物,与纯化蛋白共做碱基切除修复(BER)实验,最后琼脂糖凝胶电泳鉴定.结果 成功构建了pET28a(+)-polβ重组表达载体;在BER实验中,野生型DNA聚合酶β能够在DNA底物的酶切位点处将其切开,突变型DNA聚合酶β不能或部分将其切开.结论 野生型DNA聚合酶β能够修复单碱基缺失的DNA底物,而突变型DNA聚合酶β在碱基缺失修复过程中的作用丧失或减弱.
胃癌、DNA聚合酶β、IPTG诱导、镍柱亲和层析、碱基切除修复
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R730.2(肿瘤学)
2012-01-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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