双靶向诱导超抗原TSST-1基因重组逆转录病毒的包装及鉴定

摘要：

目的 包装出携5拷贝缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(CEAp)联合调控的超抗原中毒性休克综合征毒素-1 (TSST-1)基因的逆转录病毒,并建立稳定表达TSST-1的人结肠癌Lovo细胞株.方法 应用已构建好的逆转录病毒载体pLEGFP N1 5HRE-CEAp TSST-1 linker-CD80TM,与辅助质粒pMB-MLV、pMB-G共转染入293T细胞,LaSRT法检测病毒滴度.包装出的逆转录病毒感染CEA阳性的人结肠癌细胞株Lovo和CEA阴性的人宫颈癌细胞株Hela.应用RT-PCR和免疫组化方法鉴定TSST-1的表达.结果 获得重组逆转录病毒滴度约为1×106 CFU/mL.RT-PCR及免疫组化证实经病毒感染的Lovo细胞在mRNA和蛋白水平均有TSST-1表达,缺氧环境中的mRNA表达量更高,且细胞传代20次后依然有TSST-lmRNA表达；经病毒感染的Hela细胞在常氧或缺氧状态下均无TSST-1mRNA及蛋白表达.结论 包装出较高滴度重组逆转录病毒,并能靶向性在CEA阳性肿瘤内稳定表达TSST-1,为后续检验TSST-1对肿瘤的杀伤效应奠定了基础.

关键词：逆转录病毒、超抗原、缺氧诱导、CEA阳性肿瘤、免疫基因治疗

所属期刊栏目：32

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30672070,30400430;陕西省科学技术研究发展计划项目2009K01-70

在线出版日期：2012-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：540-544