葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA3.1-LC2的真核细胞表达和免疫分析
目的 验证葎草花粉主要变应原核酸疫苗(pcDNA3.1-LC2)能否在真核细胞内表达,并进行免疫原性、免疫保护作用、安全性等分析.方法 应用磷酸钙沉淀法将pcDNA3.1-LC2转染至HEK293细胞,提取RNA并行RT-PCR,利用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,验证所分离出的条带与目的 片段是否一致;应用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠,ELISA方法测定血清中IgG、IgE浓度和脾组织匀浆中IL-4、IFN-γ浓度;制备葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,应用pcDNA3.1-LC2对葎草花粉变应性哮喘模型小鼠进行免疫治疗,行肺泡灌洗液沉渣细胞计数,肺泡灌洗液沉渣滴片瑞士染色并嗜酸性粒细胞分类计数;取左肺上叶行肺脏病理HE染色,ELISA方法测定肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ浓度,并测定血清中IgG、IgE浓度.结果 琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,于750bp处分离出一明显的条带,与目的 片段一致;采用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠后,血清IgG浓度升高,IgE浓度无明显变化,脾组织匀浆中IL-4浓度降低,IFN-γ浓度升高;免疫过程中未引起过敏反应、免疫损伤及急性肺损伤;应用该核酸疫苗免疫葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,可明显降低气道炎症级别、减轻炎症细胞浸润、降低嗜酸性粒细胞百分比,引起血清中IgG浓度升高和IgE浓度降低,肺泡灌洗液中IL-4浓度降低和IFN-γ浓度升高,再次激发时哮喘症状明显减轻.结论 pcDNA3.1-LC2可在真核细胞内表达,诱导TH1/TH2平衡向TH1方向转化,具有免疫原性及免疫保护作用,安全性较好.
支气管哮喘、葎草花粉变应原、核酸疫苗、真核表达、免疫原性
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R562.1(呼吸系及胸部疾病)
国家自然科学基金资助项目30772010
2011-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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155-160,174
