结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,非变性条件下镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白pET-DnaA,并用Western blot检测和鉴定重组蛋白,用纯化得到的重组蛋白制备特异性免疫血清.结果 成功构建了结核杆菌pET-DnaA重组质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达;用分离纯化后的重组蛋白免疫动物,获得高效价的特异性免疫血清.结论 结核杆菌DnaA蛋白及其特异性抗体的成功制备,为进一步研究该蛋白在结核菌DNA复制机制中的作用奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、DnaA蛋白、DNA复制起始、原核表达

所属期刊栏目：32

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：陕西省卫生厅科学研究基金项目08E04

在线出版日期：2011-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：50-53,88