通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

摘要：

目的 构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用.方法 使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV.在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV.应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达.结果 重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011 cfu/mL,浓缩后可达2×1013 cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体.插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV.感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光.结论 构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础.

关键词：重组腺伴随病毒、载体、报告基因、基因治疗、NIH3T3

所属期刊栏目：28

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30471877

在线出版日期：2007-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-17