应用特异性噬菌体抗体克隆和筛选新的大肠癌抗原基因

摘要：

目的构建人大肠癌细胞cDNA表达文库,用抗人大肠癌噬菌体抗体CH209筛选新的大肠癌抗原基因.方法抽提人大肠癌细胞HRT-18的总RNA后分离mRNA,利用SMART(Switching Mechanism at 5th end of RNA Transcript)技术合成cDNA,与λTripIEx2载体连接包装成cDNA文库.测定原始文库的滴度和文库重组率,鉴定插入片段的大小,测定扩增文库库容量并鉴定CH209筛选的阳性克隆.结果原始文库滴度为6.5×106pfu/mL,重组率为97%;插入片段的大小介于0.5-2.0kb之间;扩增文库滴度为1.1×109pfu/mL,筛选后获得10个阳性克隆,代表10个抗原基因,其中5个与已知基因高度同源,3个与已知基因部分同源,2个是新基因.结论成功构建了人大肠癌细胞的cDNA文库;用CH209筛选得到10个大肠癌相关抗原基因,有2个是新基因.

关键词：大肠癌、cDNA文库、抗原、噬菌体人抗体、基因克隆

所属期刊栏目：27

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目30300155

在线出版日期：2006-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：113-116