人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白.方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体.将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白.应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性.结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒.转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白.计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%.Western-blot检测显示表达产物具有特异性.结论成功构建了PET BPI193重组表达质粒.在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白.

关键词：杀菌/渗透增强性蛋白、基因表达、大肠杆菌

所属期刊栏目：27

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：陕西省科技计划2002K10-GI-19;陕西省卫生厅资助项目02D38

在线出版日期：2006-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：11-14