人正常肾组织全长cDNA文库的构建及鉴定

摘要：

目的构建人正常肾组织的cDNA文库并鉴定文库质量.方法运用mRNA 5′末端的模板转换方法以powerscript 逆转录酶进行转录,在mRNA 的5′末端添加一段5′-oligo做为延伸后的模板,从而富集全长cDNAs.扩增后的cDNAs经sfiⅠ酶切、柱层析洗脱,重组于λTripIEx2载体并包装后,测定滴度、重组率,扩增文库.随机挑取8个噬菌斑行PCR反应扩增插入片段.结果构建的cDNA文库滴度为2.6×106pfu*mL-1, 重组率>95%, 扩增后滴度达9×1011pfu*mL-1.8个插入片段长度为0.7～2.0 kb.结论构建的人正常肾组织cDNA文库为高效全长的cDNA文库,符合cDNA文库的要求,可以用探针、抗体等做免疫学筛选, 进一步探寻与肾脏疾病相关的基因.

关键词：肾组织、cDNA文库、全长

所属期刊栏目：25

分类号：R394.3

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：217-219