重组人突变型471TNF-α及野生型TNF-α的表达及活性初步鉴定

摘要：

目的采用原核表达系统,表达人突变型471TNF-α蛋白,并检测其生物学活性.方法采用PCR技术扩增突变型471TNF-α及野生型TNF-α cDNA片段,克隆入中间载体pUCm-T中,并测序证实.以限制性内切酶切下目的片段,克隆入pBV220中,转入大肠杆菌DH5α,温度诱导表达野生型及突变型471TNF-α蛋白.初步纯化蛋白后,采用MTT法评估两者对L929细胞的杀伤作用.结果①获得了测序正确的野生型TNF-α及突变型471TNF-α的cDNA克隆;②构建了正常人野生型TNF-α及突变型471TNF-α重组表达质粒;③经温度诱导,TNF-α及突变型471TNF-α蛋白均获得了表达;④初步的生物学活性研究表明,突变型471TNF-α蛋白的杀伤作用显著高于野生型.结论突变型471TNF-α的生物学活性优于野生型TNF-α,为进一步开展TNF-α的基础及临床研究奠定了基础.

关键词：TNF-α、突变体、蛋白表达

所属期刊栏目：24

分类号：R392.11

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-16,29